流式細胞儀是怎么運行的
流式細胞儀的分選功能是由細胞分選器來完成的。總的過程是：由噴嘴射出的液柱被分割成一連串的小水滴，根據選定的某個參數由邏輯電路判明是否將被分選，而后由充電電路對選定細胞液滴充電，帶電液滴攜帶細胞通過靜電場而發(fā)生偏轉，落入收集器中；其它液體被當作廢液抽吸掉，某些類型的儀器也有采用捕獲管來進行分選的。穩(wěn)定的小液滴是由流動室上的壓電晶體在幾十KHz的電信號作用下發(fā)生振動而迫使液流均勻斷裂而形成的。一般液滴間距約數百μm。實驗經驗公式f=v/4.5d給出形成穩(wěn)定水滴的振蕩信號頻率。其中v是液流速度，d為噴孔直徑。由此可知使用不同孔徑的噴孔及改變液流速度，可能會改變分選效果。使分選的含細胞液滴在靜電場中的偏轉是由充電電路和偏轉板共同完成的。
充電電壓一般選+150V，或-150V；偏轉板間的電位差為數千伏。充電電路中的充電脈沖發(fā)生器是由邏輯電路控制的，因此從參數測定經邏輯選擇再到脈沖充電需要一段延遲時間，一般為數十ms。測定延遲時間是決定分選質量的關鍵，儀器多采用移位寄存器數字電路來產生延遲?？筛鶕唧w要求予以適當調整。（50）數據處理原理：FCM的數據處理主要包括數據的顯示和分析，至于對儀器給出的結果如何解釋則隨所要解決的具體問題而定。①數據顯示：FCM的數據顯示方式包括單參數直方圖、二維點圖、二維等高圖、假三維圖和列表模式等。
直方圖是一維數據用作的圖形顯示形式，既可用于定性分析，又可用于定量分析，形同一般X—Y平面描圖儀給出的曲線。根據選擇放大器類型不同，坐標可以是線性標度或對數標度，用“道數”來表示,實質上是所測的熒光或散射光的強度。坐標一般表示的是細胞的相對數。圖10-2給出的是直方圖形式。只能顯示一個參數與細胞之間的關系是它的局限性。二維點圖能夠顯示兩個獨立參數與細胞相對數之間的關系。坐標和坐標分別為與細胞有關的兩個獨立參數，平面上每一個點表示同時具有相應坐標值的細胞存在（圖10-3）。
可以由二維點圖得到兩個一維直方圖，但是由于兼并現象存在，二維點圖的信息量要大于二個一維直方圖的信息量。所謂兼并就是說多個細胞具有相同的二維坐標在圖上只表現為一個點，這樣對細胞點密集的地方就難于顯示它的精細結構。經熒光染色的細胞受合適的光激發(fā)后所產生的熒光是通過光電轉換器轉變成電信號而進行測量的。光電倍增管（PMT）為常用。PMT的響應時間短，僅為ns數量級；光譜響應特性好，在200～900nm的光譜區(qū)，光量子產額都比較高。光電倍增管的增益從10到10可連續(xù)調節(jié) ，因此對弱光測量十分有利。
光電管運行時特別要注意穩(wěn)定性問題，工作電壓要十分穩(wěn)定，工作電流及功率不能太大。一般功耗低于0.5W；陽極電流在幾個毫安。此外要注意對光電管進行暗適應處理，并注意良好的磁屏蔽。在使用中還要注意安裝位置不同的PMT，因為光譜響應特性不同，不宜互換。也有用硅光電二極管的，它在強光下穩(wěn)定性比PMT好。從PMT輸出的電信號仍然較弱，需要經過放大后才能輸入分析儀器。
流式細胞計中一般備有兩類放大器。一類是輸出信號輻度與輸入信號成線性關系，稱為線性放大器。線性放大器適用于在較小范圍內變化的信號以及代表生物學線性過程的信號，例DNA測量等。另一類是對數放大器，輸出信號和輸入信號之間成常用對數關系。在免疫學測量中常使用對數放大器。因為在免疫分析時常要同時顯示陰性、陽性和強陽性三個亞群，它們的熒光強度相差1～2個數量級；而且在多色免疫熒光測量中，用對數放大器采集數據易于解釋。此外還有調節(jié) 便利、細胞群體分布形狀不易受外界工作條件影響等優(yōu)點。
低壓制備色譜通常有兩種模式，一種是在柱上方加壓，另一種是在柱下方減壓。除了加減壓外，其他的與經典柱色譜法基本一致。減壓一般是用真空泵來完成，加壓一般用空氣泵氮氣鋼瓶蠕動泵等完成。在低壓制備色譜中使用的是顆粒較大的填料，因此其分辨率是有限的?！ ≈袎褐苽渖V是利用恒流泵抽送流動相，帶著樣品流經色譜柱，實現對樣品的分離。中壓制備色譜系統(tǒng)由溶劑瓶、恒流泵、進樣閥、色譜柱、檢測器、記錄儀和餾分收集器等部分組成。其色譜柱一般是由耐壓的強化玻璃制成，填料顆粒大小比低壓制備色譜所用填料小，分離效率更高。
